最近晚节不保，养的细胞污染了。上一波实验不得不停，原定这一周的实验也做不成了。
那就讲讲养细胞的那些事儿吧。


这一篇会比较长。
先来了解一下细胞结构。高中学过的。
视频时长7分多，非常虐嘴巴了。不过内容做得很生动。
专业词汇：
cell membrane 细胞膜which separates the inside of the cell from its environment
cytoplasm 细胞质which is a jelly-like fluid
eukaryotic 真核的；prokaryotic 原核的
organelles 细胞器 Organelle means "little organ"，organelles are the specialized parts of a cell that have unique jobs to perform.
Chromatin 染色质 the tangled, spread out form of DNA found inside the nuclear membrane. chromosomes 染色体 When a cell is ready to divide, DNA condenses into structures known as chromosomes. 染色质和染色体一起记忆
nucleolus 核仁 which is a structure where ribosomes are made
ribosome 核糖体，生成蛋白质的细胞器have the important job of synthesizing or making proteins

endoplasmic reticulum 缩写ER, 内质网
the Golgi apparatus, or the Golgi body 高尔基体，包装蛋白质的地方
Vacuoles 液泡 in this plant cell, the center vacuole stores water 植物细胞中的液泡储存水
lysosome 溶酶体 They are filled with enzymes that break down this cellular debris 充满各种酶来分解细胞碎片，细胞内的垃圾桶
mitochondrion 线粒体，给细胞供能
cytoskeleton 细胞骨架，包括microfilaments 微丝和 microtubules 微管

photoautotrophic 光合自养的，这样的细胞需要chloroplast 叶绿体发生光合作好用，叶绿体内含有chlorophyll叶绿素，所以它是绿色的
cell wall 细胞壁，动物细胞并没有细胞壁，植物细胞有

再列举两个unique的structure
cilia 纤毛，单数形式cilium
flagella 鞭毛，单数形式flagellum。人类中具有鞭毛结构的只有精子细胞

其实普通显微镜下并不能看清这些结构，trypan blue台盼蓝染色后能看到核，但只有一个点点的大小。
养细胞的基本操作下面视频非常详细了。这些专业词汇先熟悉一下

cell culture 细胞培养，culture 文化，名词，这里用作“培养”，可以做名词也可以做动词
reagents 试剂
sterile 无菌的
laboratory 实验室，或实验室的。口语中常用“Lab”代替
medium 培养基，复数media
pipettes 移液管
pipetAid 移液枪，也有叫pipetboy的，和pipettes配套使用。


光培养细胞的容器就有好几种：
dish 培养皿

plate 培养板，常用的六孔板和十二孔板6-well plate，12-well plate

flask 培养瓶

细胞房中常用的设备：
a cell culture hood 超净台，实验操作台通常说bench
an incubator 培养箱
a water bath 水浴锅
a centrifuge 离心机，注意到这里bath和centrifuge也是动词，洗澡，离心，这里在动词前面加a变成对应的名词
a refrigerator/freezer 冰箱/冷冻柜
a hemacytometer 血细胞计数板
a microscope 显微镜

细胞培养最重要就是无菌操作，视频中从试剂保存到超净台物品摆放都有给出规范，非常详细了：

If you use a water bath, make sure to keep bottles upright with necks out of the
water. Specially designed bottle weights are available for use with the GIBCO bottle.
这一点我深有感触，如果一瓶培养液只剩一点点，放到水浴锅里会被浮力掀翻而瓶口朝下，这样就很容易被污染。这里weights是作为名词，就是压在瓶口保证不翻的，实在不知道对应的中文叫什么。

Bath beads are a cleaner, greener alternative to the water bath. 暂时没用过浴珠。听起来就比水浴锅干净很多。注意这里green 环保，alternative 替代

Correct chair height and body position prevent shoulder stress, and also helps prevent contamination. 这点也是非常痛的领悟，同事是个大长腿，每次在她之后用超净台我都必须要把椅子调矮。因为长时间坐着以及低头操作，腰椎和颈椎出问题的人真的不少，这里关怀一下肩部压力也是很暖了。

Wipe the hood with 70% ethanol before and after use. Each item in the hood should be sprayed with 70% ethanol and wiped clean. 酒精是必需品，任何拿进超净台的东西都要喷一喷，擦干净

Make sure you're working with the cells you are expecting in your culture.这个问题对于同时培养多种细胞系的人来说尤其重要，要防止细胞间交叉污染，这一点我在HeLa细胞那一篇讲过，HeLa是细胞界的“隔壁老王”，很容易把其他细胞污染了。

虽然视频对于熟练细胞培养的来说，简直就是太啰嗦了。
不过做实验就是这样，落实起来，全是细节。

一开始我们可能只有一管细胞，但细胞可以分裂的嘛，一生二二生四的，所以一管细胞我们可以养一养冻存许多管。这个视频教你如何冻存细胞。

a permanent marker 永久记号笔，大部分记号笔酒精一喷就能擦掉，其他有机溶剂也能溶解，永久记号笔就擦不掉，这点很重要

pre-chilled 预冷，对应的预热 pre-warmed
isopropanol 异丙醇

suspension and adherent cells 悬浮细胞和贴壁细胞。名字已经很明显地指明了两种细胞的差别。
要收集贴壁细胞你需要先让它不贴壁，adherent cells need to be removed from the culture plates before starting the freezing procedure.

TrypLE is added to dissociate the culture and detach the cells from the flask. 比较常用的是trypsin 胰蛋白酶，作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。胰酶消化蛋白，而细胞膜又富含各种膜蛋白，所以消化过头会对细胞造成损伤，需要控制时间。这里说到他们的新产品TrypLE，trypsin的改良版，更稳定，也无需加入培养液终止消化。No inactivation is necessary when using TrypLE.

Make sure your tubes are balanced in the centrifuge. balance这里用作动词，配平。离心的时候要对称摆放，对称摆放的物品质量要相同这样才能平衡，越高速的离心机这一点越重要，不然就毁了离心机了。

Resuspend the pellet 重悬沉淀。离心后得到沉淀再加入液体将它悬浮，就叫重悬

Triturate the cells for a single cell suspension. 不知道这个triturate怎么具体翻译，实际操作中，重悬后的细胞容易结团，不均匀，我们会将移液管一端垂直于瓶底，只留一点缝隙缓慢打出重悬的细胞，这样就可以打散成单细胞悬液。

If you have a large volume, resuspend the cells frequently so they are homogenous. 即使重悬后的细胞静止一会也会有沉降，如果你操作很慢，又不重新吹打细胞悬液，就很容易冻存的一管稠，一管稀，不均质 homogenous

Use the Mr. Frosty container, or similar device, to ensure the cell solution decreases in temperature by 1 degree Celsius each minute. Slow, regulated freezing minimizes cell damage. 细胞冻存和复苏遵从“慢冻快融”的原则: 当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反．结晶就大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。我也使用视频中的Mr. Frosty container，但我们平时不这么叫它，直接叫它isopropanol tank。实话说，我并不知道这个盒子可以每分钟降温1度。

After freezing overnight at -80 degrees Celsius, the cells are frozen and ready for permanent storage in a liquid nitrogen tank. liquid nitrogen tank液氮罐，液氮的温度很低，最低温度为零下209.86摄氏度，实验室常用来长期保存样品。液氮罐里取出来的东西，如果不戴手套直接长时间手拿，手会“烫伤”。液氮让手的温度变得极低，当液氮气化之后，低温皮肤接触“高温”空气，就容易烫伤了。我知道有液氮冰淇淋，把普通的东西变得有趣，真的是非常会赚钱了。


遇到细胞污染还是挺麻烦的。
没有找到具体介绍污染的视频，这里有个视频可以大概看下细菌污染长什么样子。

Now you are ready to culture your cells.